当前位置:k8凯发-凯发k8国际 > 技术文章 > 血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案
简介
本方法使用创新型分体式hmr净化管/96孔板结合96孔正压固相萃取装置一步式净化血清样品,再通过lc-ms/ms进行检测,回收率达90%左右。样品处理过程简单,结果准确。
方法优势
ø 蛋白沉淀和磷脂去除一步完成,可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响
ø 通过式净化,极大简化前处理步骤,约1h即可完成前处理操作
ø 上样量仅需50μl,大大节省了宝贵的样品
ø 试剂耗材使用量更少,更加环保节约
ø 柱效远超直通式spe,回收率稳定,可达90%左右
配套设备及耗材
序号 | 产品名称 | 产品描述 |
1 | 96孔正压固相萃取装置 | ez pre-96正压固相萃取装置 |
2 | 96孔氮吹仪 | ez vap-96氮吹仪 |
3 | 双位96孔氮吹仪 | ez vap-192双位96孔氮吹仪 |
4 | mixmate® 混匀小精灵 | mixmate®主机,不含样品管管架,230 v/50-60 hz(cn) |
5 | 8道移液器 | 8-通道,10-100µl, 可调量程 |
6 | 超效分体96孔集成板hmr | hmr s-micro bio 96 well, 15mg, 1 ml, 1/pk |
7 | 超效分体96孔spe板hmr | hmr s-micro bio spe, 15mg, 1 ml, 100/pk |
8 | 超效96孔板微径小柱适配器 | micro columnadapter rack,sus,1/pk |
9 | 20种全氟混标(包含方法中15种全氟) | pfas mixture with 20 analytes, 5 µg/ml in methanol/water,1ml |
10 | 11-氯-3-氧杂全氟十一烷磺酸钾 | 50 µg/ml,1ml,甲醇/水,cas:83329-89-9 |
11 | 13种全氟内标 | mass-labelled pfc extraction standards solution 2.0μg/ml 1.2ml |
12 | 血清中全氟质控品y2403 | inspq pfc reference material y2403,1/kit |
13 | 血清中全氟质控品y2301 | inspq pfc reference material y2301,1/kit |
14 | 血清中全氟质控品y2304 | inspq pfc reference material y2304,1/kit |
15 | leosil c18/pfp核壳柱(gb23200.121方法专用) | leosil shell c18/pfp, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/pk |
16 | 96孔收集板 | collection plate, 1 ml/round/u-shaped, 96 well, 10/pk |
17 | 封板膜 | 660 tape sealing pad for 96 well plate,25 sheets/pad,10pad/pk |
样品前处理
仪器条件
1)色谱条件
色谱柱:leosil c18/pfp核壳柱 (2.7µm, 100* 2.1mm)
流动相:5mmol/l乙酸铵甲醇(a),5mmol/l乙酸铵水溶液(b)
流速:0.4ml/min
柱温:50℃
进样量:2μl
流动相梯度表
2)质谱条件
ab 6500 质谱检测器采用多反应检测模式(multiple
reaction monitoring,mrm),esi负离子模式。
离子源:电喷雾离子源;
扫描方式:负离子扫描;
检测方式:多反应离子监测(mrm);
电喷雾电压:-4500v;
离子源温度:400℃;
辅助气1:60psi;
辅助气2:60psi;
气帘气:30psi;
碰撞气体:medium
目标pfass的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表
方法定量限
在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限(limit of quantification,loq):(1)在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度,信噪比采用rms(root mean square,rms)方法;(2)标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20%之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释,无稀释倍数,因此方法定量限即为loq,如下表。
16种pfass的定量限
回收率和精密度
血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度(n=6)
实验注意事项
1、内标体积太小(50、20微升),稍微有损失,就会影响定量,所以建议先加样品、再加内标,最后加乙腈;
2、加液体过程中,一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪,特别是小体积加样时;
3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈,可能洗脱不完全,净化管里有残留。压完一次,加入乙腈,再正压;
4、乙腈:血清的比例从3:1开始优化;
5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。